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Sulfo-SHPP是碘化蛋白质的试剂，其将酪氨酸样残基与伯胺偶联，提高了后续碘化的产量。该试剂是不含酪氨酸残基或含有酪氨酸残基但碘化可及性有限的这一类蛋白质在碘化过程中的理想之选。也可以用Sulfo-SHPP标记蛋白质来保护蛋白质功能或免疫原性所必需的酪氨酸残基。Sulfo-SHPP含有N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，一种酯反应性基团。NHS能够与pH7～9缓冲液中的氨基(-NH2)有效反应，形成稳定的酰胺键。赖氨酸(K)残基的侧链和每条多肽的N-端都含有可用于标记的伯胺。相比于非磺化形式的碘化试剂，Sulfo-SHPP的磺化NHS酯提高了试剂的溶解度。

中文名称	钠1-{[3-(4-羟基苯基)丙酰]氧基}-2,5-二氧代-3-吡咯烷磺酸酯
英文名称	sodium,1-[3-(4-hydroxyphenyl)propanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate
其他名称	Water-Soluble Bolton-Hunter Reagent；Sulfo-SHPP
CAS号	106827-57-0
分子量	365.29
结构式

• 所需材料：
  
  • 修饰缓冲液：200mM硼酸盐缓冲液，pH9.0。
    
  • 抗生物素蛋白。
    
  • 磷酸盐缓冲液(PBS)：0.1M磷酸钠，150mM氯化钠，pH7.2。
• 操作步骤：
  
  • 将190mg抗生物素蛋白溶解在2mL修饰缓冲液中。
    
  • 使用前将5mg Sulfo-SHPP试剂快速溶解到1mL修饰缓冲液中或者，将0.5mg Sulfo-SHPP试剂直接加入抗生物素蛋白溶液中，然后跳过步骤3。
    
  • 向抗生物素蛋白溶液中加入100μL Sulfo-SHPP溶液。
    
  • 在冰上孵育3小时，定期搅拌。
    
  • 通过PBS或其他合适的缓冲液透析，去除未反应的Sulfo-SHPP试剂。
    
  • 用碘化试剂放射性标记I。

• 所需材料：
  
  • DMSO
    
  • 磷酸钠缓冲液Sodium phosphate buffer：50M磷酸钠，pH7.5。
    
  • 氯胺T Chloramine-T：使用前用磷酸钠缓冲液制备5mg/mL。
    
  • 羟基苯基乙酸Hydroxyphenyl acetic acid：使用前用纯水制备1mg/mL。
    
  • 焦亚硫酸钠Sodium metabisulfite：使用前用磷酸钠缓冲液制备12mg/mL。
    
  • 硼酸缓冲液Borate buffer：0.1M硼酸钠，pH8.3。
    
  • 细胞：10⁷～10⁹个细胞/mL硼酸缓冲液。
    
  • NaI¹²⁵。
    
  • 甘氨酸缓冲液：硼酸钠缓冲液中含0.1M甘氨酸。
    
  • 磷酸盐缓冲液(PBS)：100mM磷酸钠，150mM氯化钠，pH7.2。
• 操作步骤：
  
  • 使用前用DMSO制备0.1mg/mL Sulfo-SHPP试剂。加入1～20μL到微量离心管中。
    
  • 按顺序加入以下试剂：快速加入1～20μL 100 mCi/ml NaI，10μL氯胺-T溶液，100μL羟苯基乙酸和10μL焦亚硫酸钠。
    
  • 向1mL细胞中加入100 μCi I标记的Sulfo-SHPP试剂，并在冰上孵育30分钟。
    
  • 用100μL 0.1M甘氨酸缓冲液停止反应。
    
  • 在冰上孵育细胞15分钟。
    
  • 用PBS冲洗细胞三次。除去没有偶联的I标记的Sulfo-SHPP试剂和通过自溶释放的标记的内部组分。